生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之PCR驗(yàn)證

文章目錄

• 生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之PCR驗(yàn)證
• • 實(shí)驗(yàn)步驟一
  • 實(shí)驗(yàn)步驟二
  • 實(shí)驗(yàn)步驟三 配膠
  • 實(shí)驗(yàn)步驟四 電泳
  • 實(shí)驗(yàn)步驟五 跑膠

實(shí)驗(yàn)步驟一

在離心管加入7.5μL Master Mix 溶液，5.5μL 蒸餾水，引物各0.5μL μL 以及1μL 模板（各種植物的DNA）。

實(shí)驗(yàn)步驟二

1 95℃ 3min 升溫
2 95℃ 變性 30 s
3 58℃ 或者 60 ℃ 退火 30s
4 72℃ 延伸 45s
5 72℃ 延伸 45s 結(jié)束
選擇 Files, 點(diǎn)擊program，點(diǎn)擊新建。然后點(diǎn)擊Header, 如果是做PCR的話，Heaterd Lid 溫度選擇105℃。其他不用管。 圖片實(shí)際的翻譯時(shí)間設(shè)置可能和文字步驟不一致，以文字步驟為準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)步驟三 配膠

在等待PCR結(jié)果的過(guò)程中，先進(jìn)行配膠。稱量0.3g瓊脂糖，加入20ml TAE 溶液 ，混合后放入微波爐中2min后溶液呈透明狀后加入1μmol/L的核酸染料。（實(shí)驗(yàn)過(guò)程必須戴手套）。 瓊脂濃度根據(jù)DNA片段大小來(lái)決定，片段大，濃度低，1000bp濃度約為1.5%。片段小，濃度高，200bp濃度約為2-3%。放入凝膠槽中。根據(jù)需要，選擇不同大小的插板如下圖所示，插板有大有小。批量大的實(shí)驗(yàn)可用大插板。 等待15分鐘凝固后轉(zhuǎn)移到電泳儀器中。

實(shí)驗(yàn)步驟四 電泳

取PCR反應(yīng)好的DNA 7.0μL 插入點(diǎn)樣孔中，最右側(cè)放入Marker5000（視DNA長(zhǎng)度選擇不同的Marker）。電壓U=140V， 反應(yīng)時(shí)間=15分鐘。然后開(kāi)始電泳啦！

實(shí)驗(yàn)步驟五 跑膠

電泳15分鐘結(jié)束后，取出凝膠后小心移入電泳儀中進(jìn)行讀取。

點(diǎn)擊左上角照相，再點(diǎn)擊左下腳照相機(jī)圖標(biāo)，即開(kāi)始分析，得到電泳結(jié)果。根據(jù)DNA MAKER 對(duì)照DNA片段大小。到此實(shí)驗(yàn)就結(jié)束啦！

總結(jié)

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