直接用二代測(cè)序的技術(shù)就ok了。哺乳動(dòng)物的線粒體基因組最小，果蠅和蛙的稍大，酵母的更大，而植物的線粒體基因組最大。人、小鼠和牛的線粒體基因組全序列已經(jīng)測(cè)定，都是16.5 kb左右。

在 P CR 技術(shù)引入線粒體 DNA ( 簡(jiǎn)稱 mtDNA )分離以前 ,對(duì)于線粒體基因組全序列的測(cè)定 ,主要包括以下2 部分內(nèi)容 : ( 1 )高純度 m t DNA 的獲得 ; ( 2 ) m t DNA 片段化成適于克隆測(cè)序的短 DNA 片段 。1 . 1 　 高純度 m t D NA 的獲得高純度 m t DNA 的獲得 ,主要有密度梯度離心法和差速離心法 。 此外 , 還有在此基礎(chǔ)上進(jìn)行局部?jī)?yōu)化的方法 ,如 DN a s e法 、 堿變性法和改良的堿變性法等。氯化銫密度梯度離心法氯化銫密度梯度離心 ,不事先制備密度梯度 ,而是制備 6 mo l /L 氯化銫溶液 , 待分離的大分子溶解在氯化銫中時(shí) ,置于高離心場(chǎng)中 ,氯化銫開始沉降 ; 經(jīng)過幾小時(shí)后達(dá)到平衡 ,形成穩(wěn)定的氯化銫密度梯度 ,大分子混合物按照顆粒的密度分布 , 在各區(qū)帶中被分開 。此法可獲得極高分辨力 , 特別適用于分離不同類型的核酸。 差速離心法差速離心法 ,又稱為分級(jí)離心法 ,由 Ta m u r a 和 Ao ts uka 最早建立 , 由于組織勻漿后的混合液中 , 不同組分的質(zhì)量不同 ,利用在離心力場(chǎng)下沉淀它們的離心力不同的原理將組分分離 。 為了獲得特定的組分 ,通常需要進(jìn)行一系列的離心 。 首先選擇較低的離心速度和較短的離心時(shí)間 ,將不需要的大粒子沉淀去除后 ,再選擇較高的離心速度和較長(zhǎng)的離心時(shí)間 ,將所需的組分沉淀下來 ,而大多數(shù)更小的粒子則留在上清液中。 1 . 2 　 線粒體 DNA 片段化上述方法獲得 m t DNA 通常通過限制性內(nèi)切酶消化或超聲波隨機(jī)打斷的方法 ,片段化為適合克隆測(cè)序的短 DNA 片段 。參考公布的線粒體基因組研究通用引物,或通過近源物種的線粒體基因組全序列 , 設(shè)計(jì)出能覆蓋全基因組的引物 ,采用常規(guī) P CR 技術(shù)直接由總 DNA 中對(duì)線粒體基因組進(jìn)行擴(kuò)增 ,形成一系列長(zhǎng)度短于 5 kb的DNA 片段 , 并將其克隆進(jìn)質(zhì)粒載體進(jìn)行測(cè)序 。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的要测动物线粒体基因组序列，各位有什么好办法？的全部?jī)?nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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