由于RNaseH降解mRNA的機(jī)制在體外及體內(nèi)反義效應(yīng)中均起重要作用,因而使用RNaseH酶切體外作圖分析,作為一種篩選策略非常有意義.在體外,為了驗(yàn)證通過篩選技術(shù)獲得的位點(diǎn)而設(shè)計(jì)的反義寡核苷酸,需要分析寡核苷酸介導(dǎo)RNaseH對mRNA的切割作用。在細(xì)胞內(nèi),也可將反義核酸導(dǎo)入培養(yǎng)細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn),分析基因表達(dá)受到抑制的效果,來驗(yàn)證和判斷.在這些試驗(yàn)中,應(yīng)該嚴(yán)格設(shè)立兩種對照組:一、同一基因非靶位點(diǎn)(未被篩選的序列)的一段反義鏈序列作為組間陰性對照;二、篩選獲得的位點(diǎn)反義序列通過人工突變2~4堿基作為組內(nèi)陰性對照。

總結(jié)

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