（1）運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，人工設(shè)計(jì)并合成一個(gè)庫容量為1015-1018的隨機(jī)寡核苷酸文庫，在特定的緩沖液體系和適宜的溫度下（一般為20-35℃）與靶分子混合孵育，形成靶標(biāo)-核酸適體復(fù)合物；（2）通過濾膜過濾、親和層析、磁珠分離、毛細(xì)管電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等特定方法分離結(jié)合與未結(jié)合靶標(biāo)的核酸序列；（3）反篩選與靶分子結(jié)合的核酸序列，以排除掉非特異性結(jié)合的核酸序列；（4）對獲得的特異性結(jié)合靶標(biāo)的核酸序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增生成次級(jí)文庫，與原靶標(biāo)分子進(jìn)入下一輪篩選。（5）對篩選得到的核酸適體進(jìn)行克隆和測序，并進(jìn)行生物活性、識(shí)別位點(diǎn)與分子結(jié)構(gòu)（一級(jí)結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu)）分析，與靶分子特異性強(qiáng)、親和力高的核酸適體即可用于各種研究工作。

核酸適體篩選技術(shù)的篩選步驟主要包括:①利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建人工合成的單鏈隨機(jī)寡核苷酸文庫,其隨機(jī)序列長度為20～100個(gè)堿基;②將靶點(diǎn)分子與隨機(jī)寡核苷酸文庫一起溫育,保留與之結(jié)合的寡核苷酸;③結(jié)合PCR體外擴(kuò)增技術(shù),經(jīng)過多輪篩選,使能與靶點(diǎn)分子特異結(jié)合的寡核苷酸序列得到富集,最終篩選得到核酸適體。

總結(jié)

以上是生活随笔為你收集整理的核酸适体筛选技术的筛选步骤是怎样的？的全部內(nèi)容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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