如何鉴定一个完全未知的基因的功能?
生活随笔
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如何鉴定一个完全未知的基因的功能?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
確定一個未知基因的功能的實驗方法有很多,比如:基因敲除,酵母雙雜交,定點突變,基因過表達,噬菌體展示等。具體請參考:楊金水 基因組學 高教出版社 2002.
可以做real time PCR或者promoter:GUS看基因在哪些組織和器官表達;可以構建基因:GFP載體轉到擬南芥里看蛋白在細胞內的定位,順便看可不可以complement mutant。如果可以,接下來用該植物提取蛋白,做IP或者克隆該基因通過yeast2hybrid找它的結合蛋白,從這里入手如果找到已知功能的結合蛋白就可以增加該蛋白的信息量了。找到結合蛋白可以通過各種方法來確定結合,然后看結合蛋白被knock out以后植物有沒有表型,根據不同的結果再做后續的實驗。
可以做real time PCR或者promoter:GUS看基因在哪些組織和器官表達;可以構建基因:GFP載體轉到擬南芥里看蛋白在細胞內的定位,順便看可不可以complement mutant。如果可以,接下來用該植物提取蛋白,做IP或者克隆該基因通過yeast2hybrid找它的結合蛋白,從這里入手如果找到已知功能的結合蛋白就可以增加該蛋白的信息量了。找到結合蛋白可以通過各種方法來確定結合,然后看結合蛋白被knock out以后植物有沒有表型,根據不同的結果再做后續的實驗。
總結
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