定位候選克隆包括三個(gè)基本步驟：基因組定位、候選cDNA的獲得、全長(zhǎng)及功能分析。基因組定位：新發(fā)展起來(lái)的，尤其在分離腫瘤易感基因中常用的方法是用PCR方法檢測(cè)多樣本的雜合性丟失(LOH)或純合性丟失的高發(fā)頻率區(qū)，從而獲得疾病候選基因定位。候選cDNA的獲得：基因組定位提供的信息包含一定的分子標(biāo)記，可用PCR或雜交的方法直接從YAC(yeastartificialchromosome)庫(kù)，或從BAC(bacterialartificialchromosome)庫(kù)、PAC(P1artificialchromosome)庫(kù)中篩選相對(duì)應(yīng)的克隆。YAC庫(kù)的嵌合性嚴(yán)重且操作難度較大，已逐步為PAC庫(kù)和BAC庫(kù)取代。全長(zhǎng)及功能分析：獲得了眾多的候選cDNA后，通過(guò)篩選cDNA文庫(kù)或RACE等方法克隆全長(zhǎng)基因。

包括基因組定位、候選cDNA的獲得、全長(zhǎng)及功能分析三個(gè)步驟。近些年來(lái)，RH譜(radiation hybrid map)的建立，使染色體精細(xì)定位成為可能。這些方法比原先連鎖分析的檢測(cè)速度更快、精確度更高。例如L-C Tsui用連鎖分析花費(fèi)了大約10年的時(shí)間才把囊性纖維變性基因定位在7號(hào)染色體，而現(xiàn)在可能只要一年或更短的時(shí)間就可完成這項(xiàng)工作。

定位候選克隆分為以下幾個(gè)步驟：ａ．將致病基因定位到染色體某一區(qū)段，與定位克隆方法基本一致，可以使用連鎖分析或是相關(guān)分析；ｂ．利用已知染色體遺傳和物理圖譜結(jié)合該區(qū)域內(nèi)的基因功能、組織定位等信息尋找候選基因；ｃ．對(duì)候選基因進(jìn)行表達(dá)和突變分析；ｄ．在新的家系或病例對(duì)照樣本中驗(yàn)證候選基因的突變．如果突變被證實(shí)，進(jìn)一步分析基因產(chǎn)物的功能并推測(cè)致病機(jī)理．其中，確定候選基因是關(guān)鍵步驟。

總結(jié)

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