PCR中如何计算引物的浓度?
生活随笔
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PCR中如何计算引物的浓度?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
根據國際統一標準: 1OD引物干粉約為33微克; 引物的摩爾數(μmol) =質量數 / 引物分子量 =(OD數×33)/引物分子量如您拿到1管2 OD的引物, 分子量是6565.3, 引物的摩爾數(μmol) =(2×33)/6565.3 ≈0.010μmol=10 nmol若您需要溶解為10μM (=10pmol/μl)的溶液,只需加入1 ml無菌ddH2O或10 mM pH7.5 TE緩沖液充分溶解即可。
方法如下:引物保存在高濃度的狀況下比較穩定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 溶解前需要核對合成報告單和引物標簽上的引物OD數是否一致。一般情況下,將引物的濃度配制成50pmol/ul,加水的體積(微升)按下列方式計算:V (微升)= OD數(乘)33 *(乘)(乘)20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度,按上述公式換算。注意:1 OD260= 33 ug/ml.
一般PCR反應中的引物終濃度為0.2-1.0μmol/L。引物過多會產生錯誤引導或產生引物二聚體, 過低則降低產量。利用紫外分光光度計, 可精確計算引物濃度, 在1cm光程比色杯中,260nm下,引物濃度可按下式計算:X mol/L= OD260/ A(16000)+C(70000)+G(12000)+T(9600)X: 引物摩爾濃度,A、C、G、T: 引物中4種不同堿基個數。
可以將引物的濃度配制成50pmol/ul,加水的體積(微升)按下列方式計算:V (微升)= OD數×33 ×20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度,按上述公式換算。
方法如下:引物保存在高濃度的狀況下比較穩定。引物一般配制成10-50pmol/ul。 溶解前需要核對合成報告單和引物標簽上的引物OD數是否一致。一般情況下,將引物的濃度配制成50pmol/ul,加水的體積(微升)按下列方式計算:V (微升)= OD數(乘)33 *(乘)(乘)20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度,按上述公式換算。注意:1 OD260= 33 ug/ml.
一般PCR反應中的引物終濃度為0.2-1.0μmol/L。引物過多會產生錯誤引導或產生引物二聚體, 過低則降低產量。利用紫外分光光度計, 可精確計算引物濃度, 在1cm光程比色杯中,260nm下,引物濃度可按下式計算:X mol/L= OD260/ A(16000)+C(70000)+G(12000)+T(9600)X: 引物摩爾濃度,A、C、G、T: 引物中4種不同堿基個數。
可以將引物的濃度配制成50pmol/ul,加水的體積(微升)按下列方式計算:V (微升)= OD數×33 ×20000 / (除) 引物的分子量。引物的分子量可以從合成報告單上獲得。如果需要配制成其他濃度,按上述公式換算。
總結
以上是生活随笔為你收集整理的PCR中如何计算引物的浓度?的全部內容,希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
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