即寡聚核酸連接酶鏈反應與聚合酶鏈反應結合的方法,是2003年最新商業化的高通量SNP分型方法,目前全球已有兩家公司推出基于OLA/PCR方法的商業化平臺:即AppliedBiosystems的3730/3100基因分析儀平臺和Illumina公司的光纖雜交芯片系統。該方法的優點是高通量、低成本,每天可做40萬-100萬個SNP基因分型,同時其準確性和成功率很高,可以在一個反應孔中做48-100個基因分型,因而也比較節約樣本DNA。其主要原理是:(1)OLA反應,每一個SNP需要設計3條40bp長的寡核酸探針,與模板DNA雜交,完全配對的探針才能被連接酶連接。通常OLA反應可以在1個反應管中同時進行48-100個SNPs位點的連接反應。(2)PCR反應,用于OLA反應的寡核酸探針兩端帶有相同的約20bp長的PCR引物結合序列,因此通過采用帶生物素標記的通用引物PCR擴增后,OLA連接產物被大量擴增,且擴增產物一端帶上生物素標記。(3)雜交,帶親和素(Avidin)的384孔反應板將OLA/PCR產物結合后,加長度不同或熒光顏色不同的雜交序列雜交,或與光纖芯片上的探針雜交。(4)電泳分析雜交序列或芯片分析雜交結果。OLA/PCR方法是目前國際人類單倍體型計劃參與研究機構一致看好的技術平臺,該平臺比較適合于以下提到的全基因組水平的關聯分析。

總結

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