表皮細(xì)胞作為基因治療的靶細(xì)胞,可通過局部合成和持續(xù)釋放外源性細(xì)胞因子,促進(jìn)局部創(chuàng)面的修復(fù)。有研究應(yīng)用病毒媒介基因轉(zhuǎn)移法,把編碼血小板源性生長因子-A的基因轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的表皮細(xì)胞,回植體內(nèi)后可合成和分泌高水平的PDGF-A,加速血管形成、纖維結(jié)締組織沉積,促進(jìn)Ⅰ型和Ⅳ型膠原合成、分泌,抑制創(chuàng)面收縮。有研究探討了含轉(zhuǎn)染EGF基因的表皮細(xì)胞復(fù)合皮的體外構(gòu)建與移植的效果,以觀察轉(zhuǎn)基因細(xì)胞對創(chuàng)面修復(fù)及細(xì)胞增殖的影響。實驗中考慮到如果單純將EGF基因轉(zhuǎn)染的自體表皮細(xì)胞移植封閉創(chuàng)面,一方面細(xì)胞培養(yǎng)、基因轉(zhuǎn)染過程復(fù)雜,耗時長。另一方面轉(zhuǎn)入基因可長期存在,可能導(dǎo)致外源基因的整合、插入,引起不良后果。而如果單純移植轉(zhuǎn)EGF基因的異體表皮細(xì)胞復(fù)合皮,盡管可預(yù)先培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染細(xì)胞,減少前期準(zhǔn)備工作,但最終因排斥反應(yīng),導(dǎo)致創(chuàng)面裸露。因此設(shè)想將自體表皮細(xì)胞與轉(zhuǎn)染EGF基因的非自體表皮細(xì)胞混合,構(gòu)建復(fù)合皮后移植,一方面可節(jié)省自體皮源,縮短自體表皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)擴(kuò)增時間,另一方面轉(zhuǎn)基因的非自體細(xì)胞逐漸被排斥,可避免外源基因插入可能導(dǎo)致的潛在危害。有研究表明,自體表皮細(xì)胞與轉(zhuǎn)EGF基因的非自體表皮細(xì)胞按1：1、1：3、1：5比例混合,均可修復(fù)創(chuàng)面,未見明顯創(chuàng)面裸露,與文獻(xiàn)報道一致。不同比例混合培養(yǎng)復(fù)合皮移植后1、2周內(nèi),均可見EGF表達(dá)。1：5混合培養(yǎng)復(fù)合皮移植后1周,新生表皮基底層中PCNA陽性細(xì)胞數(shù)較單純自體(小鼠)表皮細(xì)胞移植多。PCNA是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的核蛋白,直接參與DNA的合成,在靜止細(xì)胞內(nèi)含量很低,其表達(dá)在一定程度上可反應(yīng)細(xì)胞的增殖狀態(tài)。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)EGF基因的人表皮細(xì)胞在移植后早期分泌EGF,并可促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖,但表皮厚度及移植存活率差異均無顯著性。表明EGF的作用尚有限,可能是由于轉(zhuǎn)基因表皮細(xì)胞EGF表達(dá)量低。將自體表皮細(xì)胞與轉(zhuǎn)染EGF基因的非自體表皮細(xì)胞混合構(gòu)建復(fù)合皮,不但可節(jié)省自體皮源,而且基因修飾的表皮細(xì)胞移植后能分泌相應(yīng)的生長因子,一定程度上可提高表皮細(xì)胞的增殖活性。如何使EGF基因在體內(nèi)得到穩(wěn)定而較高的表達(dá)尚需進(jìn)一步探討。

總結(jié)

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