基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?
生活随笔
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基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?
小編覺(jué)得挺不錯(cuò)的,現(xiàn)在分享給大家,幫大家做個(gè)參考.
cDNA文庫(kù),樓上都提到了,我就不說(shuō)了,基本上就是PCR手段了。還有一些像是鳥(niǎo)槍法這個(gè)也用的很多。最最簡(jiǎn)單的就是直接分離了~
樓主說(shuō)的主要是針對(duì)已知序列的基因如何獲取,如果是針對(duì)針對(duì)序列未知的基因,最常用的方法是構(gòu)建一個(gè)基因文庫(kù)或者是cDNA文庫(kù),從中篩選出目的基因再進(jìn)行克隆來(lái)得到。構(gòu)建基因文庫(kù)的話,就要先把染色體DNA片段化,再選擇合適的噬菌體做載體,之后將片段化的DNA與載體進(jìn)行連接并包裝外殼蛋白,最后用得到的重組噬菌體去感染大腸桿菌,得到的溶菌產(chǎn)物即為基因文庫(kù)。得到的文庫(kù)后期還需要進(jìn)行鑒定,以便需要時(shí)可隨時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增。如果是構(gòu)建cDNA文庫(kù),則需要先將mRNA逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,然后再進(jìn)行片段化,它和基因文庫(kù)的唯一區(qū)別就是DNA來(lái)源不同,拿到DNA后的構(gòu)建步驟基本一致。
我們所說(shuō)的基因,是指mRNA,將mRNA反轉(zhuǎn)錄之后,得到RNA-DNA雜合cDNA雙鏈,想得到基因,那就設(shè)計(jì)引物,從cDNA中PCR獲得基因片段。如果知識(shí)片段序列,那就直接設(shè)計(jì)引物,PCR拉出全長(zhǎng)就可。人工合成的話,成本太高,一般是想設(shè)計(jì)一段序列,用于以后的實(shí)驗(yàn)。
補(bǔ)充一樓二樓的吧。目前獲取預(yù)測(cè)基因序列的方式非常多樣的。除了上面說(shuō)的構(gòu)建cDNA文庫(kù),還有通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序這也是一種很好的辦法。方法就是提取合格的樣品,然后進(jìn)行測(cè)序和拼接,不過(guò)一般得到了就是unigene或者contigs,還需要按照一樓的方法進(jìn)行克隆。還有就是假如你研究的某個(gè)樹(shù)種的基因已經(jīng)得到測(cè)序了,那么直接在數(shù)據(jù)庫(kù)里搜集就可以的。
樓主說(shuō)的主要是針對(duì)已知序列的基因如何獲取,如果是針對(duì)針對(duì)序列未知的基因,最常用的方法是構(gòu)建一個(gè)基因文庫(kù)或者是cDNA文庫(kù),從中篩選出目的基因再進(jìn)行克隆來(lái)得到。構(gòu)建基因文庫(kù)的話,就要先把染色體DNA片段化,再選擇合適的噬菌體做載體,之后將片段化的DNA與載體進(jìn)行連接并包裝外殼蛋白,最后用得到的重組噬菌體去感染大腸桿菌,得到的溶菌產(chǎn)物即為基因文庫(kù)。得到的文庫(kù)后期還需要進(jìn)行鑒定,以便需要時(shí)可隨時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增。如果是構(gòu)建cDNA文庫(kù),則需要先將mRNA逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,然后再進(jìn)行片段化,它和基因文庫(kù)的唯一區(qū)別就是DNA來(lái)源不同,拿到DNA后的構(gòu)建步驟基本一致。
我們所說(shuō)的基因,是指mRNA,將mRNA反轉(zhuǎn)錄之后,得到RNA-DNA雜合cDNA雙鏈,想得到基因,那就設(shè)計(jì)引物,從cDNA中PCR獲得基因片段。如果知識(shí)片段序列,那就直接設(shè)計(jì)引物,PCR拉出全長(zhǎng)就可。人工合成的話,成本太高,一般是想設(shè)計(jì)一段序列,用于以后的實(shí)驗(yàn)。
補(bǔ)充一樓二樓的吧。目前獲取預(yù)測(cè)基因序列的方式非常多樣的。除了上面說(shuō)的構(gòu)建cDNA文庫(kù),還有通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序這也是一種很好的辦法。方法就是提取合格的樣品,然后進(jìn)行測(cè)序和拼接,不過(guò)一般得到了就是unigene或者contigs,還需要按照一樓的方法進(jìn)行克隆。還有就是假如你研究的某個(gè)樹(shù)種的基因已經(jīng)得到測(cè)序了,那么直接在數(shù)據(jù)庫(kù)里搜集就可以的。
總結(jié)
以上是生活随笔為你收集整理的基因工程技术中获取目的基因的方法有哪些?的全部?jī)?nèi)容,希望文章能夠幫你解決所遇到的問(wèn)題。
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