怎样进行基因表达产物的功能分析?
生活随笔
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怎样进行基因表达产物的功能分析?
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
確實不容易。一樓說的方式使驗證基因功能,樓主是想問基因表達產物的功能分析,我知道的就是做原核表達,在菌株中誘導基因產物,基因產物即蛋白,你將該蛋白分離,分離后你可以驗證其在什么過程中發揮作用,一般來說,作用的底物都是需要公司購買的。
這個雖然有難度,但策略還是很多的,具體有:(1)找已知功能的同源蛋白或同源結構域,推論功能并用實驗驗證;(2)在細胞內過表達該基因,觀察其對細胞各種功能的影響;(3)利用反義核酸,RNA干涉,核酶在細胞水平抑制基因表達,從而分析細胞功能變化,建立基因剔除小鼠,分析該基因產物的功能;(4)分析與該基因產物相互作用分子,或者是相互作用的蛋白分子或核酸。
每個人的理解不同,要求也不一樣。如果是未知的功能,直接驗證蛋白功能很難,并且影響因素太多。我們一般間接研究,大致三個方面:過表達看特定功能是否增強;敲除或沉默后看特定功能是否喪失;轉基因看是否表現出特定功能。
我們實驗室這里做的話最常用的是western bolt,不過這個基本上還是有一些前期成果作為依據的。還有一個個人覺得比較好的就是SILAC技術,有反應直接有變化,接下來在做一些具體的相互反應什么的~
這個雖然有難度,但策略還是很多的,具體有:(1)找已知功能的同源蛋白或同源結構域,推論功能并用實驗驗證;(2)在細胞內過表達該基因,觀察其對細胞各種功能的影響;(3)利用反義核酸,RNA干涉,核酶在細胞水平抑制基因表達,從而分析細胞功能變化,建立基因剔除小鼠,分析該基因產物的功能;(4)分析與該基因產物相互作用分子,或者是相互作用的蛋白分子或核酸。
每個人的理解不同,要求也不一樣。如果是未知的功能,直接驗證蛋白功能很難,并且影響因素太多。我們一般間接研究,大致三個方面:過表達看特定功能是否增強;敲除或沉默后看特定功能是否喪失;轉基因看是否表現出特定功能。
我們實驗室這里做的話最常用的是western bolt,不過這個基本上還是有一些前期成果作為依據的。還有一個個人覺得比較好的就是SILAC技術,有反應直接有變化,接下來在做一些具體的相互反應什么的~
總結
以上是生活随笔為你收集整理的怎样进行基因表达产物的功能分析?的全部內容,希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
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