WB 方案设计技巧
WB 實驗常常讓人頭疼,不是沒結果就是趨勢不對,即使做了很多優化調整,結果卻仍不盡人意。這是因為我們的關注點往往是 WB 步驟有沒有出錯,而從來沒有部署過 WB 的全局。其實做 WB 前,我們需要做一次 WB 設計!沒錯,臨床試驗需要設計,WB 也需要設計,只有把整體的實驗設想進行合理地規劃才能獲得最佳的實驗結果。那如何做 WB 設計呢??
第一件要做的事情就是知己知彼!
一
了解你的目標蛋白
我們首先需要收集目標蛋白以下信息:
1.?目標蛋白的名字
2.?目標蛋白在哪些組織中表達,是否具有特異性
3.?目標蛋白的分子量
4.?目標蛋白在細胞中的表達位置及表達量
5.?是否有相應的抗體
如何獲取這些信息呢?除查詢文獻外我們可以借助生物信息學方法及一些產品信息獲取相關信息。例如使用 Uniport,維基百科,NCBI,ExPASy 等進行查詢。還可以通過相應抗體產品提供的信息進行查詢。
了解了目標蛋白以上內容后,我們就可以開始做 WB 設計啦!
二
WB 方案設計
1. 首先明確實驗目的,為什么要做這個 WB 實驗?要驗證哪些問題?
例如:是想驗證目標蛋白的表達情況?還是要驗證目標蛋白在細胞幾個不同組分中表達差異?或者是進行蛋白定位、蛋白轉運過程的研究?
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總結
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