? ? pET系統是目前應用最為廣泛的原核表達系統，已經成功地在大腸桿菌中表達了各種各樣的異源蛋白。經過與使用過和正在使用這個系統的科學家的交流，我們發現了一些在使用pET系統的過程中以及原核表達中的一些常見問題。在此，我們選取了其中一些比較有代表性的問題，附上我們的建議改進方案，并期待和你一起分享成功的喜悅。

原核表達研究者關心的10個問題：

1.目的蛋白總是以不可溶的形式出現真是令人煩惱

????在大腸桿菌中表達的異源蛋白經常發生錯誤的折疊，并聚集成為包涵體。經過誘導，目的蛋白通常可達細胞總蛋白的50%以上。雖然有一定比例的蛋白以可溶的單體形式存在，而多達95%（甚至更多）的蛋白則在包涵體中。實踐中，有很多實驗室采取降低誘導溫度，例如 25–30°C (Burton et al. (1991)Prot.Exp. Purif.2, 432-441)，或降低IPTG濃度(0.01–0.1mM)并延長誘導 時間，還 有采用特別的培養基 (Blackwell and Horgan (1991) FEBS Lett. 295, 10-12)等方法獲得更多的可溶蛋白。隨著越來越多的蛋白折疊途徑被闡明，相信會出現更多有效的增加可溶性目的蛋白的實驗方法。然而，讓目的蛋白以包涵體形式聚集也并非總是壞事。不溶態在某些情況下非常有利：

a. 形成包涵體是目的蛋白表達量很高的表現。

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總結

以上是生活随笔為你收集整理的原核表达常见问题解答的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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