WB, IHC实验问题总结与处理方案
生活随笔
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WB, IHC实验问题总结与处理方案
小編覺得挺不錯的,現在分享給大家,幫大家做個參考.
1、western blot 的優點
答: 靈敏,可達ng級,用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便,特異性高。
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2、為什么我的細胞提取液中沒有目標蛋白?
答: 原因有很多:
a) 你的細胞中不表達這種蛋白質,換一種細胞;
b) 你的細胞中的蛋白質被降解掉了,你必需加入PMSF,抑制蛋白酶活性;
c) 你的抗體不能識別目標蛋白,多看看說明,看是否有問題。
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3、我的細胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,為什么呢?
答: a) 有沉淀可能因為你的蛋白沒有變性完全,可以適當提高SDS 濃度,同時將樣品煮沸時間延長, b) 也不排除你的抗原濃度過高,這時再加入適量上樣緩沖液即可。
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4、我做的蛋白質分子量很小(10KD),請問怎么做WB?
答:可以選擇0.2μml的膜,同時縮短轉移時間。也可以將兩張膜疊在一起,再轉移。其他按步驟即可。
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總結
以上是生活随笔為你收集整理的WB, IHC实验问题总结与处理方案的全部內容,希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。
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