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取材：

1.腎小管節段的分離(機械網篩濾過法)：
①取 Wistar 大鼠斷頸法處死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分鐘。
②將大鼠轉移入超凈工作臺，取腰部切口迅速取出腎臟，置于盛有生理鹽水的培養皿中清洗并除去包膜和腎蒂組織。
③取皮質置于80目篩網上，剪碎成1-2mm3大小組織塊，網下放盛有少量生理鹽水的培養皿。
④用玻璃注射器內芯于80目網上充分研磨組織。
⑤收集 80 目網下液體轉移至 100 網篩上，用生理鹽水沖洗。
⑥將100目網上組織用生理鹽水沖洗入另一培養皿中，收集置入離心管中。1500 轉/分鐘離心5分鐘，棄去上清。

2 腎小管節段的消化及培養
①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重懸沉淀，37℃溫箱中消化約10分鐘。
②加入3ml(雙倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 轉/分離心8分鐘，棄上清。
③加入約3ml RPMI1640 懸浮沉淀，并用吸管充分吹打混勻，接種于培養瓶中。
④分離腎小管節段接種于培養瓶后，第一天加入少量培養基，置入37℃,5%CO2孵育箱中靜置培養。
⑤培養過夜后，第二天加入足量的培養基，靜置培養。
⑥培養 72 小時后首次換液，以后每兩天換液一次。
⑦約第六到七天細胞生長基本融合成單層。

總結

以上是生活随笔為你收集整理的大鼠原代肾小管上皮细胞培养扩增方案的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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