StepOnePlus定量PCR儀之使用心得

發布: 2014-04-18 01:42:34 ?? 來源: 賽默飛 AppliedBiosystems

摘要：

StepOnePlus? 實時熒光定量PCR系統是Life

Technologies(原ABI)推出的一款96孔實時熒光定量PCR儀。它采用基于LED的長壽命四色光學系統，可提供精確的熒光定量PCR結果，

無論是新手，還是經驗豐富的用戶，均可使用。近日，賓夕法尼亞州立大學的Rebecca Crouse談了談她的使用心得。

StepOnePlus? 實時熒光定量PCR系統是Life Technologies(原ABI)推出的一款96孔實時熒光定量PCR儀。它采用基于LED的長壽命四色光學系統，可提供精確的熒光定量PCR結果，無論是新手，還是經驗豐富的用戶，均可使用。近日，賓夕法尼亞州立大學的Rebecca Crouse談了談她的使用心得。

她們實驗室主要研究的是氣質或性格與生理和健康的相關性。換句話說，也就是在面對挑戰時，個體的行為和生理反應有何差異，以及這如何影響個體的疾病易感性和衰老速度。她們在大部分研究工作中使用動物模型，并研究大腦中的基因表達水平如何隨不同行為而上調或下調。

她們之所以選擇StepOnePlus，是因為Life Technologies的產品質量好，簡單易用，技術人員有很大幫助，且軟件程序豐富多彩，不過價格也很貴。

在實驗過程中，她們采用TRI試劑來勻漿嚙齒類動物的大腦組織，隨后提取RNA，逆轉錄成cDNA。之后利用TaqMan分析組分，對幾個感興趣的基因開展qPCR分析，其中看家基因β-actin作為對照。

Crouse并沒有貼出具體的實驗結果，但大致介紹了一下。她們在分析中采用相對定量(△△Ct)法。首先通過樣品中目的基因的平均Ct值減去看家基因的平均Ct值，獲得△Ct，再將實驗樣品的△Ct 減去對照樣品的△Ct，而獲得△△Ct，最后通過2-△△Ct計算表達水平。

Crouse認為，如果你在一塊反應板上運行整個實驗，則StepOnePlus為你完成所有計算。當然，如果你使用多塊反應板，你只能從軟件中獲得△Ct，并手動計算。

她認為，這臺儀器使用簡單，結果很好，如果價格能承受的話，是個不錯的選擇。不過，她也發現軟件有時會傻傻

的。例如，運行開始后若主屏幕上出現一個帶感嘆號的三角形，則要立即停止運行。如果你繼續運行，將無法在運行結束后收集結果。打開模板，將文件重命名，通

常能解決這個問題。這種情況很少發生，而她們也一直沒找到原因。

另外，Crouse還提到了一些定量PCR實驗的建議。試劑盒建議在暗處的冰上準備反應，但她認為沒必要。

探針不應該長時間暴露在強光下，但制備一塊反應板的時間還不足以影響產品。在第一次收到探針時就將其分裝，以避免反復凍融。同時，master

mix的保質期很短，通常只有6個月，而且很貴，所以一次不要訂購太多。

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總結

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