beta 值和 M 值: 衡量样本甲基化水平的金标准
在甲基化芯片中,一次檢測的是很多細胞的甲基化狀態。對于某個CpG 位點來說,有些細胞的這個位點是甲基化的,而另外的細胞是非甲基化的。
對于探針的甲基化水平,最常見的定量方式包括beta 值和M 值兩種。
beta 值
計算公式為
M / (M + U + offset)
U 代表非甲基化信號強度,M 代表甲基化的信號強度, offset 是偏移量。 offset 是為了防止分母為0的情況出現。beta值實際上是甲基化信號強度的百分比。
在minfi中,使用getBeta函數計算探針的beta 值
> head(getMeth(mSet)[1, 1:3])5640269011_R01C01 5640269011_R01C02 5640269011_R02C01 cg00050873 ? ? ? ? ? ? ?5284 ? ? ? ? ? ? ? 137 ? ? ? ? ? ? ? 214 > head(getUnmeth(mSet)[, 1:3])5640269011_R01C01 5640269011_R01C02 5640269011_R02C01 cg00050873 ? ? ? ? ? ? ?6645 ? ? ? ? ? ? ? 148 ? ? ? ? ? ? ? 246 > head(getBeta(mSet)[, 1:3])5640269011_R01C01 5640269011_R01C02 5640269011_R02C01 cg00050873 ? ? ? 0.442954145 ? ? ? ? 0.4807018 ? ? ? ? 0.4652174探針cg00050873在樣本5640269011_R01C01中的甲基化信號強度為 5284,非甲基化信號強度為 6645, 5284 /(5284 + 6645) 正好就是beta值。
從這里也可以看出,minfi中的getBeta 函數默認的offset 值為0。在GenomeStudio軟件中,計算beta值時offset = 100。 在minfi中,如果想要和GenomeStudio軟件的beta值保持一致,需要設置getBeta的offset 參數,比如 getBeta(mSet, offset = 100)。
M值
計算公式為
log2 (M / U)
U 代表甲基化信號強度,M 代表非甲基化的信號強度
在minfi中,使用getM函數計算探針的M 值
> head(getM(mSet)[1, 1:3])5640269011_R01C01 5640269011_R01C02 5640269011_R02C01 cg00050873 ? ? ? ?-0.3306387 ? ? ? -0.11142128 ? ? ? ?-0.2010475探針cg00050873在樣本5640269011_R01C01中的甲基化信號強度為 5284,非甲基化信號強度為 6645, log2 (5284 / 6645) 正好就是M值。
beta 值是最常用的甲基化水平的定量方式,主要用于差異分析,而M值適用于樣本間的特征比較,比如基于M值的矩陣,通過MDS的方法來分析樣本間的關系。
總結
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