我們在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過程中易受到較多因素影響，導(dǎo)致支原體污染，對(duì)此就要對(duì)其進(jìn)行支原體檢測(cè)，排除被污染的可能，就需要借助相關(guān)的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行支原體檢測(cè)，那么支原體檢測(cè)方法有哪些？常用的是直接培養(yǎng)法、DNA熒光染色法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，PCR檢測(cè)法等方法進(jìn)行檢測(cè)。

1. 直接培養(yǎng)法。

直接培養(yǎng)法是檢測(cè)支原體的標(biāo)準(zhǔn)方法。是把樣品接種到支原體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，并通過觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化或是固體培養(yǎng)基上是否生長(zhǎng)支原體菌落進(jìn)行判斷，但培養(yǎng)法所需培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，要3～4周左右的時(shí)間，其次用培養(yǎng)法不能在同一培養(yǎng)基中檢測(cè)出所有的支原體類型，該方法常用于對(duì)種毒或疫苗成品的支原體檢測(cè)。

2. DNA熒光染色法。

DNA熒光染色法，是把要檢測(cè)的樣品接種在指示細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，然后用特異性熒光染料進(jìn)行染色，再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，通過附著在細(xì)胞表面的支原體DNA的著色情況判斷該樣品是否被支原體污染。該方法用時(shí)短，可進(jìn)行多個(gè)樣品檢測(cè)，還能檢測(cè)出使用直接培養(yǎng)法難以檢測(cè)出的支原體類型。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)DNA熒光染色法比直接培養(yǎng)法更為敏感、方便，耗時(shí)短、準(zhǔn)確穩(wěn)定。

3. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)即ELISA檢測(cè)法，對(duì)診斷支原體是較方便和準(zhǔn)確的方法之一，常見的ELISA檢測(cè)法有間接法和抗原競(jìng)爭(zhēng)法等，檢測(cè)支原體都有較好的特異性及敏感性，并且可以一次性進(jìn)行多樣品檢測(cè)，并且成為檢測(cè)支原體的常規(guī)方法之一，一般是通過比色法得出相應(yīng)的結(jié)果進(jìn)一步來判定是否有支原體污染的情況。

4. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)法。

PCR方法是一種DNA復(fù)制的體外擴(kuò)增方法，由于支原體生長(zhǎng)緩慢對(duì)營(yíng)養(yǎng)環(huán)境要求較高，對(duì)支原體直接培養(yǎng)法檢測(cè)還有一定局限性，而PCR檢測(cè)法相對(duì)于直接培養(yǎng)法更為快速、敏感。其中的巢式PCR檢測(cè)法是在普通PCR檢測(cè)方法上進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)的，通過巢式PCR引物擴(kuò)增后存在的目的片段情況進(jìn)行合理判斷，并可以對(duì)支原體類型進(jìn)行準(zhǔn)確的分析及判斷，進(jìn)一步對(duì)污染源進(jìn)行判斷。

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總結(jié)

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